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RNeasy FFPE Kit (50)   

详细描述

RNeasy FFPE Kit (50)

从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA

  • 创新的方法用于克服福尔马林造成的交联
  • 有效的释放RNA而不破坏其完整性
  • 高效的实验方案,在85分钟内即可获得纯化的RNA

RNeasy FFPE Kit专为从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中纯化总RNA而设计。独特的裂解和孵育条件逆转福尔马林对RNA的修饰。并且裂解缓冲液可将RNA从组织切片中有效释放出来,防止RNA的进一步降解。试剂盒同样使用DNase和DNase Booster Buffer优化,去除基因组DNA的污染。使用RNeasy MinElute离心柱纯化获得的总RNA,洗脱体积可小至10 μl。整个纯化流程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。

real-time RT-PCR分析的可靠结果。

使用RNeasy FFPE Kit或者Supplier EIII、Supplier N、Supplier AIV和Supplier M的同类试剂盒,从10 µm大鼠肺FFPE样本中纯化总RNA。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上进行PGK1(磷酸甘油酸激酶1)的real-time RT-PCR分析,包括(+RT)或不包括(-RT)逆转录步骤。使用RNeasy FFPE Kit在-RT样本中获得高CT值,表示纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。因此,使用RNeasy FFPE Kit在+RT样本中获得的CT值代表了可靠的RNA表达水平。

RNA产量更高。

使用RNeasy FFPE Kit或者Supplier N、Supplier AIV和Supplier M的同类试剂盒,从标示的10 µm大鼠肺组织的FFPE切片中纯化RNA。测量260 nm处的吸光值,确定RNA的产量。

RNeasy FFPE实验流程。

从样本中去除石蜡后,在优化的裂解缓冲液中,采用蛋白酶K酶切,只需15分钟即可完成样本裂解,且不影响RNA的产量。裂解后,将样本置于80ºC孵化15分钟,逆转福尔马林交联。然后使用DNase和DNase Booster Buffer高效去除基因组DNA,包括FFPE样本中的小DNA片段。最后,使用RNeasy MinElute离心柱纯化浓缩的RNA。RNA的洗脱体积仅为14–30 µl,因此可以减少下游操作中的反应体积。

成功的real-time RT-PCR分析。

使用RNeasy FFPE Kit从大鼠肾脏中纯化总RNA。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪上,使用(+RT)或不使用(-RT)逆转录酶进行PGK1(磷酸甘油酸激酶1)的real-time RT-PCR分析。-RT曲线证明,使用RNeasy FFPE Kit纯化的RNA中几乎不含基因组DNA。

回收各种有用RNA。

在Agilent 2100 Bioanalyzer上使用RNeasy FFPE Kit或者Supplier AIV、Supplier N或Supplier M的同类试剂盒,从6个月的FFPE大鼠肝脏中纯化RNA。峰值表示,与使用其他试剂盒相比,使用RNeasy FFPE Kit可以纯化获得更完整的RNA。



性能
使用RNeasy FFPE Kit从固定和包埋的样本中纯化获得的RNA的产量比用其他方法更高。回收得到的完整RNA最小可达70 nt,并且几乎没有基因组DNA的污染。用该试剂盒从FFPE样本中纯化得到的RNA片段非常适用于real-time RT-PCR等敏感的下游应用。
原理

用福尔马林固定组织会导致RNA-RNA和RNA-蛋白质的交联,这会影响RNA在酶学分析中的性能。FFPE样本固定和包埋同样会导致核酸的严重片段化。RNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件来逆转福尔马林对RNA的修饰。裂解缓冲液能使RNA从FFPE组织样本中有效释放,并防止进一步的RNA降解。经优化的条件能纯化得到所有可用的RNA,使用RNeasy FFPE Kit从FFPE样本中得到的RNA的产量比其他方法更高。

操作流程

整个RNeasy FFPE操作流程可在85分钟内完成。使用蛋白酶K裂解样本仅需15分钟。裂解后,样本在80ºC下孵育15分钟。之后,用DNase处理能有效去除样本中的基因组DNA,包括小的DNA片段。最后,使用RNeasy MinElute离心柱即可收集纯化的RNA,洗脱体积14–30 µl。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行。

应用

RNeasy FFPE Kit可纯化FFPE 样本中所有大于70 nt RNA,得到适用于RT-PCR等众多下游应用的RNA片段。但是,从FFPE样本中纯化得到的RNA会严重片段化,不能用于需要完整RNA的下游应用。如果使用片段化RNA可能需要做些修饰(例如在RT-PCR时设计小的扩增子)。进行cDNA合成时,不能使用oligo-dT引物,而要使用随机或基因特异性引物。

特点
参数
Applications PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
Elution volume 14–30 µl
Format Spin column
Main sample type FFPE tissue samples
Processing Manual (centrifugation), automated (QIAcube)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein RNA
Sample amount 1*5 µm to 4*10µm sections
Technology Silica technology
Time per run or per prep 70 minutes
Yield Varies
  • 目录号:73504
  • 品牌:Qiagen
  • 规格:50U
  • 目录价:¥6520.00
  • 市场价格:¥5542.00
  • 会员价格:¥5542.00
  • 数量:

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结束时间:
参加人数:人