QIAGEN Plasmid Midi Kit (100)
详细描述
纯化至多100 µg转染级质粒或柯斯质粒DNA
- 纯化得到相当于2次CsCl梯度离心得到的DNA纯度
- 高产量质粒DNA
- 经济的制备方法
- 使用LyseBlue，获得最佳的裂解效果和最大的DNA产量
QIAGEN Plasmid Kits通过重力流阴离子交换柱纯化转染级质粒DNA。该试剂盒可纯化获得至多100 μg质粒DNA。离心获得澄清的裂解产物和异丙醇沉淀。
转染效率与质粒纯化方法。
采用不同方法制备pRSVcat DNA，通过脂质体介导的转染将其导入指定的细胞系内，40小时后测定CAT表达水平，确定转染效率。每个柱形代表4个独立的转录的平均值（2个质粒制备物分别转染2次）。使用QIAGEN Plasmid Kit可获得最高的转染效率。
QIAGEN Plasmid Kit实验方案。
将中性细菌裂解物直接置于QIAfilter Cartridge内孵育，数秒内即可过滤澄清。然后将澄清的裂解物上样至阴离子交换纯化柱，在适当的低盐和pH条件下，质粒DNA会选择性地结合上去。利用中盐浓度的洗涤液去除RNA、蛋白质、代谢物及其他低分子量杂质，使用高盐缓冲液洗脱超纯的质粒DNA。利用异丙醇沉淀对DNA进行浓缩并脱盐，并通过离心收集。
QIAGEN-tips内独特的阴离子交换树脂专为纯化核酸设计。它独特的分离特性，使纯化的DNA的纯度相当于连续2次CsCl梯度离心得到的DNA纯度。预装的QIAGEN-tips利用重力流原理工作，缩短了纯化质粒的手动操作时间。整套QIAGEN质粒纯化体系避免使用苯酚、氯仿、溴化乙锭和CsCl等有毒物质，减小对使用者和环境的危害。
使用QIAGEN Plasmid Kits，细菌裂解物通过离心澄清。澄清后的裂解物上样到阴离子交换柱，质粒DNA在适当的低盐条件和pH条件下与树脂进行选择性结合。RNA、蛋白质、代谢产物和和其它低分子量杂质用中盐洗涤液去除，用高盐缓冲液洗脱纯质粒DNA。纯化得到的DNA用异丙醇沉淀浓缩和脱盐后，通过离心收集。
QIAGEN Plasmid Kits纯化得到的质粒DNA适合多种应用，如：
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转染
- 克隆
- PCR
-
体外转录
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特点
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参数
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| Applications | Transfection, cloning, sequencing, capillary sequencing etc. |
| Culture volume/starting material | 25–100 ml culture volume |
| Plasmid type | High-copy, low-copy, cosmid DNA |
| Processing | Manual (centrifugation) |
| Samples per run; throughput | 1 sample per run |
| Technology | Anion-exchange technology |
| Time per run or prep per run | 150 min |
| Yield |
- QIAGEN Plasmid Purificationプロトコールとトラブルシューティング - (JA)
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- Re-Purification of Plasmid DNA Prepared by Methods other than QIAGEN Tips - (EN)
- QIAGEN Plasmid Kits Selection Guide - (EN)
- (EN) - QIAGEN Plasmid Purification Handbook — April 2012
